На третьем этапе реализации проекта с целью развития бинарных технологий протонной терапии с использованием наночастиц была проведена отработка технологии создания наноформуляций (НФ) на основе композитных наночастиц (НЧ) путем их функционализации оболочкой полиэтиленглюколя и адресными молекулами (DARPins, Affibodies), и наработка наноформуляций для экспериментов по определению терапевтического эффекта бинарного воз-действия in vitro и in vivo на моделях мышей. Работы по синтезу нанокомпозитных материалов типа ядро-оболочка на основе висмута и золота были проведены совместно с профессором Парасом Прасадом, Институт лазерных исследований, фотоники и биофотоники, Университет Баффоло, США. Были синтезированы нанокомпозитные структуры Bi@SiO2, и структуры Au c оболочкой из Si. Изучение физико-химических свойств получаемых композитных наноматериалов показало, что они имеют сферическую форму (со средним размером 250-300 нм для Bi@SiO2, и 20-40 нм для Au-Si), кроме того, использование биосовместимой оболочки из SiO2 позволяет не только снизить токсичность ядра из Bi, но и сохранить все исходные мультимодальные тераностические свойства.
Проведены исследования токсичности наработанных наноформуляций на основе композитных наночастиц и выживаемости различных типов клеточных культур (опухолевых и здоровых) после облучения сканирующим протонным пучком в присутствии данных НФ. Полученные экспериментальные данные позволяют сделать заключение о различной радиосенсибилизирующей активности синтезированных нанокомпозитов. Нанокомпозиты на основе золота (Au-PEG и Au-DARPin), наночастицы нитрида гафния (HfN) и наночастицы оксида железа (Fe2O3) не вызывают выраженных токсических эффектов для всех исследованных типов клеток, обладают высокой степенью биосовместимости и выраженными радиосенсибилизирующими свойствами при протонном облучении в дозе 2 Гр и концентрациях наночастиц 25 и 50 мкг/мл, что обеспечивает возможность их дальнейшего использования в качестве перспективных радиосенсибилизаторов в бинарных технологиях протонной терапии. Наночастицы титана и тантала также продемонстрировали радиосенсибилизирующее действие в отношении опухолевых клеток, однако данные НФ требуют оптимизации для дальнейшего использования с целью снижения незначительных выявленных токсических эффектов. Анализ клоногенной активности в условиях протонного облучения показал выраженные токсические свойства НЧ гексаборида лантана на всех типах исследованных клеточных культур в концентрациях выше 5 мкг/мл, что ограничивает возможность их дальнейшего безопасного использования в модельных системах in vivo.
Впервые проведены эксперименты по исследованию противоопухолевой эффективности наночастиц с использованием вектора при внутривенном введении без и в сочетании с бинарной лучевой терапией на моделях in vivo иммунодефицитным (nude) животным с ксенографтами опухолей человека.
Установлено, что НФ Au-SH-PEG-NH2 при комбинированном внутривенном и внутриопухолевом введении способны усиливать противоопухолевые эффекты протонной терапии.
Радиосенсибилирующий эффект значителен и стабилен: в присутствии НФ Au-SH-PEG-NH2 с присоединенным белком-вектором (DARPin) к рецептору HER2 протон-индуцированное (доза протонов 15 Гр) торможение роста карциномы протоков молочной железы человека BT-474 у мышей Nu/j возрастает на 15-25%.